Preparação de cortes Histológicos Parte 1

Células e tecidos são invisíveis a olho nu. Para que possam ser observados se faz necessário o uso do microscópio. Após a retirada da biopsia* não é possível observar ainda ao microscópio, antes, deve-se passar a biópsia por inúmeros processos para tornar possível sua observação.

Esses processos serão divididos em: Fixação, Inclusão (desidratação e inclusão propriamente dita), Microtomia e Coloração.

FIXAÇÃO:

É o primeiro processo após a retirada da biópsia. Tem como objetivo evitar a digestão dos tecidos por enzimas(autólise) ou por bactérias e preservar a estrutura e a composição molecular da célula. Para isso mergulha-se a biópsia em uma solução de formaldeído a 4% tamponado. O formaldeído formará pontes com moléculas vizinhas estabilizando as células.

OBS: O glutaraldeído é o fixador mais adequado para microscopia eletrônica pois preserva a ultra-estrutura das células e matriz

INCLUSÃO:

Neste processo o tecido já fixado será infiltrado por substâncias que lhe conferirão a consistência rígida para que possa ser feito cortes milimétricos com o micrótomo. Vou diferenciar esse processo em duas etapas: Desidratação e Inclusão propriamente dita.

1. Desidratação: A parafina é uma substância apolar e portanto não é miscível em água. A célula possui muita água em sua composição dificultando a inclusão com substância apolar. Para resolver esse problema deve-se desidratar o tecido colocando-o em álcool em concentrações crescentes (primeiro álcool 70%, depois 80% e daí por diante até o álcool absoluto). Após isso é acrescentado o xilol pra fazer a diafanização (clarificação). O xilol é um solvente orgânico que ocupa os espaços da água e é miscível em parafina e além disso torna o tecido translúcido.
2. Inclusão propriamente dita : Após todo esse processo o tecido será imerso em parafina derretida à 58-60ºC. O calor causa a evaporação do xilol e os espaços deixados são ocupados pela parafina. O tecido embebido em parafina torna-se rígido após o resfriamento. 

Após a inclusão, a biopsia fica em um bloco de parafina e pode ser cortado ou ser guardado por muito tempo.

*biopsia no contexto refere-se a parte que foi retirada durante o procedimento cirúrgico e vai passar por todo o processo.


REFERÊNCIA: Junqueira, L.C; Carneiro, J. Histologia Básica. editora Guanabara Koogan, 10 edição